鎳瓊脂糖凝膠 Ni(NTA)

英文名稱(chēng)：Ni Berpharose FF-NTA

貨號(hào)：B2776

1.      產(chǎn)品介紹

鎳-瓊脂糖凝膠FF(NTA)以瓊脂糖微球?yàn)榛|(zhì)，活化偶聯(lián)次氮基三乙酸（NTA），之后螯合Ni2+。鎳-瓊脂糖凝膠FF(NTA)主要用于分離能被金屬離子吸附的多肽、蛋白、核苷酸、磷酸化蛋白及帶 His標(biāo)簽的重組蛋白。 

鎳 NTA瓊脂糖凝膠 FF具特異性好，螯合鎳更穩(wěn)定，不易脫落，能耐受一定強(qiáng)度的還原劑，物理和化學(xué)穩(wěn)定性好。

2.規(guī)格

1ml（預(yù)裝柱）、5ml（預(yù)裝柱）、10ml（預(yù)裝柱）、20ml、100ml、500ml

3.產(chǎn)品性能

性能

指標(biāo)

基質(zhì)

6%瓊脂糖微球

配基

Ni2+

載量

≥40mg His標(biāo)簽蛋白/ml

粒徑

45-165μm

建議流速

50-300 cm/h

耐壓

0.3MPa

工作溫度

4-40℃

pH穩(wěn)定范圍

3-10

儲(chǔ)存緩沖液

20%乙醇

儲(chǔ)存溫度

4-8℃

4.純化流程

①平衡

鎳-瓊脂糖凝膠FF柱用2-5個(gè)柱體積的初始緩沖溶液進(jìn)行平衡。

建議流速為100 cm/h。

②上樣

（1）樣品一般溶解于pH6-8的初始緩沖液中。提高上樣緩沖液的pH值可以增大載量。

（2）常用緩沖液有10-100 mM磷酸鈉緩沖液、20-200 mM Tris-HCl緩沖液等。

（3）緩沖液中一般要加入0.15-0.5 M的NaCl以消除離子交換作用。

（4）初次使用鎳-瓊脂糖凝膠FF時(shí)，推薦使用50 mM PBS（50 mM NaH2PO4、0.3 M NaCl、pH 8.0）作為初始緩沖液。

③洗脫

（1）增加咪唑濃度進(jìn)行洗脫是鎳-瓊脂糖凝膠FF最-常-用的洗脫方法。

（2）咪唑?yàn)閴A性，相應(yīng)緩沖液配制后需要用HCl調(diào)節(jié)pH值。

（3）初次使用鎳-瓊脂糖凝膠FF時(shí)，如不確定洗脫需要的咪唑濃度，推薦在初始緩沖液中分別加入10 mM、20 mM、50 mM、100 mM、200 mM、500 mM咪唑，濃度從低

到高分別洗脫和收集重組蛋白，之后通過(guò)SDS-PAGE電泳等方法鑒定洗脫結(jié)果。

（4）有條件的可以進(jìn)行咪唑梯度線性洗脫以確定較佳的洗脫條件。

洗脫方法：

（1）降低pH洗脫：大多數(shù)蛋白在pH4-6會(huì)被洗脫下來(lái)（也可以在pH 3~4），緩沖液可以是醋酸鈉、檸檬酸和磷酸鹽緩沖體系。

（2）競(jìng)爭(zhēng)性洗脫：線性增加或一步增加同金屬離子有親和力的競(jìng)爭(zhēng)物質(zhì)的濃度（如0-0.5M咪唑、0-50 mM組-氨酸、0-2M NH4Cl）。梯度洗脫最好在起始緩沖液的恒定pH值下進(jìn)行。

 5.在位清洗

（1）去除因離子交換作用吸附的蛋白：使用1.5M NaCl溶液接觸時(shí)間為10-15分鐘清洗，然后，再使用去離子水清洗10個(gè)柱體積。

（2）去除強(qiáng)疏水性蛋白和脂質(zhì)等：通過(guò)使用30%異丙醇清洗5-10個(gè)柱體積，接觸時(shí)間為15-20分鐘可以去除此類(lèi)污染物。

然后，再使用10倍柱體積的去離子水清洗。也可以選擇使用含有去污劑的酸性或堿性溶液， 清洗填料2倍柱體積。例如，含有0.1–0.5%  非離子去污劑的0.1 M  醋酸溶液，接觸時(shí)間 為1–2  小時(shí)。去污劑處理后，需要使用70%的乙醇清洗5個(gè)柱體積，以徹-底去除去污劑。 最后使用10倍柱體積的去離子水清洗。

5.注意事項(xiàng)：

1)使用時(shí)保證柱子和緩沖液的溫度一致，避免柱床內(nèi)產(chǎn)生氣泡，影響純化效果。

2)本產(chǎn)品保存條件為20%乙醇，4-8℃。

3) 2-25℃，常壓，避光運(yùn)輸。

4）僅供科研實(shí)驗(yàn)使用。

鎳瓊脂糖凝膠 Ni(NTA)